生物大分子藥物近年來(lái)發(fā)展迅猛，特別是以抗體藥物偶聯(lián)物（Antibody drug conjugate，生物分子藥物近年來(lái)發(fā)展迅猛，特別是以抗體藥物偶聯(lián)物（Antibody drug conjugate，ADC）為代表的新型藥物正以驚人的速度崛起，成為腫瘤治療領(lǐng)域中一顆璀璨的新星。ADC是通過(guò)連接子將抗體與細胞毒性載藥偶聯(lián)而成的藥物分子。

精妙絕倫的設計，使ADC兼具抗體藥物精準靶向性和小分子細胞毒性藥物高效殺傷的雙重優(yōu)勢，猶如一枚精準制導的 “生物導彈”，在腫瘤的靶向治療中發(fā)揮著(zhù)重要作用。截止目前，全球已有17款ADC藥物被批準上市。其中，僅2024年就有83種新的ADC首次進(jìn)入臨床。據不完全統計，全球ADC藥物市場(chǎng)規模已超過(guò)130億美元。

ADC作為生物治療藥物本身結構復雜，且具有高度非均一性的特點(diǎn)，給其質(zhì)控增加了難度，對分析檢測方法提出了更加嚴苛的要求。其中，藥物抗體比（Drug-to-antibody ratio, DAR）不僅直接反映靶向腫瘤細胞的載荷數量，同時(shí)影響ADC藥物的治療效果和安全性。因此，在A(yíng)DC開(kāi)發(fā)過(guò)程和商業(yè)化生產(chǎn)運營(yíng)中，作為關(guān)鍵質(zhì)量屬性之一的DAR的測定和監測尤為重要。

疏水色譜（Hydrophobic Interaction Chromatography，HIC）是一種利用分析樣品的疏水性差異進(jìn)行分離的色譜模式，常用于A(yíng)DC藥物的DAR評估。

為此，我們月旭科技推出了一款基于疏水作用機理的高性能蛋白分離色譜柱Advanchrom HIC-Butyl，它采用先進(jìn)的大孔硅膠微球為基質(zhì)，結合獨特的表面鍵合技術(shù)，適用于抗體以及ADC的分離表征。

01 產(chǎn)品特點(diǎn)

● 獨特的化學(xué)設計，對抗體偶聯(lián)藥物分子（ADC）具有良好的選擇性

● 超高純大孔硅膠微球基質(zhì)，柱效高

● 非特異性吸附低，回收率高

● 耐壓及耐受性好

● 批次間一致性佳

● 使用較低的鹽組分即可獲得樣品良好的保留與分離

02 產(chǎn)品信息

03 案例分析

應用案例1：雙抗ADC的DAR分析

色譜條件：

色譜柱：Advanchrom HIC-Butyl

規格：3 μm, 4.6 × 50 mm

流動(dòng)相：

A）100 mM磷酸鈉緩沖溶液+1.0 M硫酸銨, pH 7.0

B）100 mM磷酸鈉緩沖溶液, pH 7.0/異丙醇=80/20

洗脫程序:

流速：0.5 mL/min

檢測波長(cháng)：280 nm

柱溫：25 ℃

進(jìn)樣量：10 μL

樣品：ADC

圖1 雙抗ADC樣品不同DAR分布

結論：在硫酸銨體系下，具有不同DAR的ADC分子可在HIC柱上實(shí)現良好的保留與高效的分離。其中裸抗疏水性最弱，優(yōu)先被洗脫，偶聯(lián)小分子藥物數量越多的分子，其疏水性就越強，越晚洗脫。

雖然使用硫酸銨體系作為流動(dòng)相在DAR的測定中有廣泛的應用，但由于其作為非揮發(fā)性鹽，不能實(shí)現與MS的兼容。為此我們在也嘗試了乙酸銨（揮發(fā)性鹽）體系，在HIC柱上獲得單抗ADC藥物DAR2峰（如圖2）與利妥昔單抗峰（如圖3）的良好保留與優(yōu)異峰形，為后續DAR的MS鑒定提供可兼容的流動(dòng)相體系。

應用案例2：?jiǎn)慰笰DC的DAR2測定

色譜條件：

色譜柱：Advanchrom HIC-Butyl

規格：3 μm, 4.6 × 50 mm

流動(dòng)相：

A）1.0 M乙酸銨

B）25 mM乙酸銨/乙腈=70/30

洗脫程序:

流速：0.5 mL/min

檢測波長(cháng)：280 nm

柱溫：30 ℃

進(jìn)樣量：10 μL

樣品：ADC

圖2 單抗偶聯(lián)ADC樣品DAR2

應用案例3：完整抗體（利妥昔單抗）的測定

色譜條件同案例2

圖3 利妥昔單抗樣品

應用案例4：標準蛋白的分離

色譜條件：

色譜柱：Advanchrom HIC-Butyl

規格：3 μm, 4.6 × 50 mm；3 μm, 4.6 × 35 mm

流動(dòng)相：

A）100 mM磷酸鈉緩沖溶液+2.0 M硫酸銨, pH 7.0

B）100 mM磷酸鈉緩沖溶液, pH 7.0/乙腈=90/10

洗脫程序:

流速：1.0 mL/min

檢測波長(cháng)：280 nm

柱溫：30 ℃

進(jìn)樣量：10 μL

樣品：(~1 mg/mL溶于流動(dòng)相A中)

1. 核糖核酸酶A  2. 溶菌酶  3. α-胰凝乳蛋白酶原

圖4 標準蛋白的分離（對比市售HIC柱）

結論：月旭科技的兩款HIC柱均可實(shí)現三種標準蛋白的良好保留與分離，且峰形與塔板數均優(yōu)于某競品柱。

04 流動(dòng)相推薦

● 在HIC-UV下，硫酸銨與乙酸銨體系均可嘗試以獲得更為滿(mǎn)意的實(shí)驗結果。

● HIC-MS下，使用乙酸銨體系。

05 質(zhì)量保證

每一根出廠(chǎng)的HIC-Butyl色譜柱都經(jīng)過(guò)成熟的裝柱工藝和嚴格的質(zhì)量管理體系生產(chǎn)，以確保良好的分離性能。

06 訂貨信息