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2023-05-23
大家剛開(kāi)始接觸液相的時(shí)候,不知道有沒(méi)有人和我一樣在想一個(gè)問(wèn)題:為啥色譜柱的內徑都是一些很零碎的數字,比如:4.6mm、2.1mm,從來(lái)沒(méi)有見(jiàn)到過(guò)5mm、10mm這種看上去讓人賞心悅目的整數。
大家會(huì )發(fā)現,市面上大部分的色譜柱都是這些奇怪的內徑規格,那...到底是為什么呢?
在學(xué)習液相色譜的基礎理論時(shí),我們總會(huì )聽(tīng)到一個(gè)如雷貫耳的名字,叫做“范第姆特曲線(xiàn)”,這個(gè)曲線(xiàn)成為了液相色譜分離當中最經(jīng)典的理論之一。
下圖中的范第姆特公式:
第一項為:渦流擴散項,
第二項為:分子擴散項,
第三項為:傳質(zhì)阻力項。
上圖為線(xiàn)速度與柱效的范第姆特關(guān)系圖
圖中的橫坐標表示線(xiàn)速度,
縱坐標表示理論塔板高度。
柱效隨著(zhù)流速提升而升高,到達一個(gè)最大值以后,又開(kāi)始隨流速增大而降低,這個(gè)讓色譜柱達到最大柱效的流速值,被叫做最佳流速。在最佳流速附近保證實(shí)際柱效與最佳柱效差異很小的一個(gè)區域內的流速,被叫做最佳流速范圍。
線(xiàn)速度指的是色譜峰譜帶移動(dòng)的速度,通常用cm/min作為單位;而流速指的是色譜儀輸液的體積流速,通常用mL/min作為單位。
線(xiàn)速度和流速換算關(guān)系為體積流量=(線(xiàn)性速度/60)×(π×d2/4),其中d為色譜柱的內徑(cm)。對于粒徑5μm的色譜柱,最佳線(xiàn)速度為1mm/s(6cm/min),相當于4.6mm內徑色譜柱的柱流速為1mL/min。這就是通常4.6mm內徑柱的推薦最佳流速為1mL/min的原因。3.0mm對應0.4mL/min,2.1mm對應0.2mL/min,1.0mm對應0.05mL/min。為了使用液相時(shí)輸入流速為整數的便利,所以目前市場(chǎng)上色譜柱的內徑均不是整數。
從范第姆特公式中可以知道色譜填充材料的顆粒直徑越小,柱效越高(板高越?。?,每一種顆粒對應一個(gè)最佳線(xiàn)速,在此線(xiàn)速下獲得最高的柱效。
從上圖中我們可以看出顆粒直徑低于2μm以下,最佳柱效下所允許的最佳限速范圍得到很大的擴展。這意味著(zhù)使用更快的流速而不會(huì )損失柱效。當使用1.7μm粒徑的色譜柱(UPLC柱)時(shí),使用的柱長(cháng)可以比常規的HPLC柱縮短至三分之一,還能達到相同的柱效。與HPLC相比,在相同的柱效和分離度下,可以縮短分離時(shí)間;與HPLC具有相同的分離時(shí)間時(shí),柱效和分離度大大提高。