在技術(shù)轉移過(guò)程中，或者說(shuō)是方法在不同實(shí)驗室間重現的時(shí)候，通常會(huì )遇到分離度變化的問(wèn)題。分離度如果變大一般情況下就不會(huì )在意這個(gè)問(wèn)題了；而如果變小，特別是本身就在限值附近的時(shí)候，對我們來(lái)說(shuō)就是一種挑戰。

那么，接下去就的策略就是各種排查。人員操作？流動(dòng)相？色譜柱？?jì)x器？等等。在經(jīng)過(guò)一系列排查之后，發(fā)現問(wèn)題出在儀器上？Oh！這個(gè)問(wèn)題好難！換個(gè)柱子換個(gè)人都簡(jiǎn)單，可是換儀器？別人家的實(shí)驗室我做不了主??！哦！小編也做不了主。但是小編或許能就簡(jiǎn)單的儀器問(wèn)題提供一個(gè)簡(jiǎn)單的解決方案——如果是因為擴散引起的話(huà)！

在開(kāi)始今天的話(huà)題之前，我們有必要先看看分離度的公式。放寬心，今天不涉及到計算。（理論基礎是有必要的，因為我們目前的大部分研究都是基于前人的基礎理論研究。）

上述給出了兩個(gè)分離度公式，從公式可以看出，無(wú)論是基于半峰寬W50的分離度計算，還是基于tangent的峰寬Wt的計算，當峰寬/半峰寬增加的時(shí)候，分離度Rs都是減少的。

當我們的組分從進(jìn)樣器經(jīng)過(guò)一定的管路到達柱子中，再經(jīng)過(guò)柱子后通常又經(jīng)過(guò)了一小段的管路，更后到達流通池中被檢測到。在這個(gè)過(guò)程當中，組分因為分子間的運動(dòng)發(fā)生擴散，從而具有一定的峰寬。見(jiàn)示意圖：

由上述示意圖可以很明顯的看到，組分擴散的越厲害，譜帶展寬越大，峰寬越寬。

再回到我們的分離度公式，前文說(shuō)過(guò)，峰寬越寬，分離度越小——這就是擴散帶來(lái)的對分離度的影響。

那么，怎么解決這個(gè)問(wèn)題呢？

將原有內徑較大的管路換成內徑更小的管路；將原有較長(cháng)的管線(xiàn)換成更短的管線(xiàn)。

用核殼柱替換原有的全多孔柱，由于核殼柱顆粒均勻度較高，加之較短的擴散路徑，峰寬就越窄，柱效往往更高。

將標準流通池換成半微量流通池或者是微量流通池——這一項更改相對上述兩項會(huì )麻煩一些，因為還需要考慮前面管線(xiàn)的影響，不能簡(jiǎn)單把流通池換了就萬(wàn)事大吉了。

講到這里，擴散的問(wèn)題就講完了。而關(guān)于上述現象及處理方法其實(shí)都是基于色譜基礎理論——速率理論，速率理論不止適用于LC,也適用于GC。當然，要用單一的模型解決所有問(wèn)題也是不現實(shí)的。不過(guò)對于我們今天的擴散問(wèn)題，速率理論已經(jīng)能很好的解決了。

另外，講到這里需要額外說(shuō)一點(diǎn)關(guān)于儀器及柱子的問(wèn)題。液相色譜發(fā)展的時(shí)間已經(jīng)不短了。那么，針對今天擴散的話(huà)題，在你使用時(shí)間較久的儀器或柱子的時(shí)候，特別是用快速柱（3.5/3.0μm或以下粒徑的色譜柱）時(shí)，很有可能就會(huì )碰到譜帶展寬而造成的分離度降低的問(wèn)題，因為早先的儀器Dwell體積是比較大的；而當你使用更新款的UPLC/UHPLC時(shí)，也別沾沾自喜，隨手一拿就是250mm/5μm的柱子，這也可謂有些暴殄天物。老板給了你一臺邁巴赫，你把它開(kāi)成了電動(dòng)三輪。小編一直說(shuō)，合適的才是更好的，對于較長(cháng)的柱子，也許您家的“老爺機”也能有優(yōu)異的表現，且不輸于你的UPLC/UHPLC;而當您使用UPLC/UHPLC時(shí)，請給它相應的更小的色譜柱，如此才能發(fā)揮出它更大的優(yōu)勢。不說(shuō)儀器廠(chǎng)商投入多少研發(fā)成本才有了現在的低Dwell體積的儀器，想想你家老板可是真金白銀才換來(lái)的新款儀器，別讓它成為擺設啦！理解，并且更大程度的發(fā)揮出優(yōu)勢，才是更高效更合理的。而我們，就是發(fā)揮這種作用的紐帶！共勉！