之前跟大家分享過(guò)一些色譜柱使用過(guò)程中的相關(guān)問(wèn)題解答，包括“峰拖尾的解決思路”、“柱壓升高過(guò)快的解決思路”、“色譜柱壽命不理想的解決思路”等等（點(diǎn)擊藍字回看往期內容），受到了大家的熱烈歡迎，大家對這些內容的關(guān)注度以非常的高。

我們今天再帶來(lái)一個(gè)熱點(diǎn)問(wèn)題的解決思路——“批次性之間重現性不好的解決問(wèn)題”！

如果預期一個(gè)方法會(huì )被用到很多年，重現性將是色譜柱選擇過(guò)程中的一個(gè)重要問(wèn)題，需要確認方法在使用期間，色譜柱一直都在供應，意味著(zhù)選擇一家大型的愿意長(cháng)期合作的廠(chǎng)商，選擇一種常見(jiàn)的鍵合相，盡量少選擇特殊或者較少使用的固定相?？梢韵冗x擇一直合作的品牌開(kāi)始，還應該從廠(chǎng)商出獲得更多的色譜柱規格和批次重現性調查信息，綜合評判。

以反相填料為例：同一批次的填料生產(chǎn)出不同的色譜柱，保留時(shí)間，塔板數，柱壓，都會(huì )有點(diǎn)差異。

保留時(shí)間的改變與填料密度和色譜柱的體積成正比，色譜柱體積重現性取決于柱內徑，柱內徑改變后，保留時(shí)間會(huì )相應改變，但分離度保持不變，那說(shuō)明你的方法重現性還是比較好的，在我們制定方法的時(shí)候，要正確的規定方法的洗脫時(shí)間表。生產(chǎn)廠(chǎng)家對柱體積改變效應造成的保留時(shí)間的改變RSD在3%左右，月旭從硬件上進(jìn)行控制，將該數值控制在1%左右。

色譜柱塔板數的變化也會(huì )影響方法，特別是涉及到剛好能基線(xiàn)分離的一對色譜峰時(shí)，一般情況下塔板數的重現性在±10%左右，標準偏差減少至2-3%，但塔板數是一個(gè)平方數，分離度取決于塔板數的2次方根，因此塔板數改變2%意味著(zhù)峰寬變化只有1%，可以核查一下色譜柱制造商的塔板數出廠(chǎng)控制數據。

任何填料在生產(chǎn)的過(guò)程中，柱壓的重現性都比較好。

不同批次之間的色譜參數的重現性問(wèn)題，那么上面提到的參數會(huì )有所改變，更重要的是不同批次的填料有可能引起分離選擇性的變化，一位置相對保留時(shí)間會(huì )變化，表現在色譜圖上的相對位置改變，不利于方法的確定。這個(gè)問(wèn)題要避免的，可以從生產(chǎn)商那里收集批次重現性是否穩定的信息，一般是檢測填料色譜性能的理化參數。

在理化參數中，更重要的是填料的比表面積，因為他的改變直接導致保留時(shí)間的改變，比表面積的變化范圍在±10%，月旭控制在±5%。

在化學(xué)參數中，鍵合相的便面覆蓋率的改變對保留時(shí)間的影響比較大，通常制造商會(huì )給出載碳量這個(gè)數值，會(huì )有一個(gè)詳細的數值，通常范圍是±10%，月旭控制在±4%以下。

制造商會(huì )有一個(gè)測試色譜重現性的試劑，采用尿嘧啶、苯酚、4-氯硝基苯、甲苯的混合溶液流動(dòng)相是75%的有機溶劑水的中性條件，對疏水化合物之間的相對保留時(shí)間重現性一般比較好，而對于載碳量的改變不太敏感，較好的批次重現性測試是在測試混合物中加入堿性化合物，經(jīng)過(guò)優(yōu)選的堿性化合物（通常選用阿米替林）在優(yōu)化過(guò)的條件下，主要和填料上游離硅醇基相互作用，而中性化合物主要和鍵合相相互作用，這樣，堿性和中性化合物之間的相對保留時(shí)間是對反相填料批次重現性的嚴格測試。月旭積累了這一類(lèi)批次重現性的測試數據，并控制在一個(gè)較小的范圍內。

上面說(shuō)到的廠(chǎng)家對重現行的控制和要求，是用于選擇色譜柱的起點(diǎn)，更終測試是對項目本身的重現性測試，一些生產(chǎn)商會(huì )有不同批次的填料色譜柱包來(lái)用于具體項目測試，而另外一些生產(chǎn)商會(huì )根據客戶(hù)的需求提供類(lèi)似的不同批次的色譜柱，我們需要的是不同時(shí)間鍵合相的相同填料裝填的色譜柱，而不是同一批次填料不同時(shí)間裝填的色譜柱，建議使用三個(gè)不同批次鍵合的填料裝填的色譜柱來(lái)測試方法的重現性，如果測試不受填料變化的影響，那可以相信該方法在幾年內都是重現的。

看完這一期的“解決思路”感覺(jué)對您有所幫助嗎？如果能夠幫到您那就是我們更開(kāi)心的了，針對色譜柱的使用維護您還有什么問(wèn)題想要尋求幫助與解答嗎？可以在文末留言，我們會(huì )選擇提問(wèn)頻率較高的問(wèn)題來(lái)為大家解答！