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2019-04-24
在做樣分析過(guò)程中,經(jīng)常會(huì )出現色譜峰圖異常的現象,比如前沿或者拖尾,這給我們的分析檢測造成了很大的困擾,而超載是導致峰形異常的原因之一,接下來(lái)首先介紹一下超載:
一、超載:
當供試品進(jìn)樣量和進(jìn)樣體積在安全的范圍內,改變進(jìn)樣量和體積會(huì )相應地影響到峰高和峰面積,而保留時(shí)間、峰寬和分離度的影響并不大,但當進(jìn)樣體積或者質(zhì)量很大的時(shí)候,就會(huì )造成超載現象,伴隨著(zhù)峰寬增加、峰型變差和分離度降低。
柱長(cháng)在50~250mm,內徑4~5mm的色譜柱,單個(gè)樣品的進(jìn)樣質(zhì)量應該在50μg以?xún)?,進(jìn)樣體積小于25 μL。超載分為體積超載和質(zhì)量超載兩種,下面將分別對這兩個(gè)超載對分離的影響做介紹。
(1)體積超載:下圖分別是1mg/mL的連翹苷10、40、60、80、100 μL的色譜圖,可以看到10 μL的峰形更好,40 μL已經(jīng)出現前延,而隨著(zhù)進(jìn)樣體積的增大,會(huì )愈發(fā)明顯。
(2)質(zhì)量超載:下圖是氨基酸及其衍生物的測定,正常質(zhì)量和超大質(zhì)量所表現出的峰形。
超載會(huì )影響到色譜峰形,當進(jìn)樣體積和質(zhì)量在合適的范圍內,是獲得良好峰形的保證,而又有哪些因素可以導致前延和拖尾呢,下面我們接著(zhù)說(shuō)。
二、前延:(拖尾因子Tf<0.95)
1. 溶劑效應的影響
(1)用流動(dòng)相溶解樣品:(姜黃素標準品)
a.用純甲醇溶解樣品 b.用流動(dòng)相溶解樣品
(2)先強溶劑溶解樣品,然后用流動(dòng)相稀釋?zhuān)海ㄊ級A甲標準品)
2、緩沖作用不合適:(注射用苦參堿)
a. 流動(dòng)相為:乙腈:3%磷酸:無(wú)水乙醇=80:10:10
b.流動(dòng)相為:(乙腈:3%磷酸:無(wú)水乙醇=80:10:10):50mM磷酸二氫鈉=80:20
3、儀器系統不合適:
當使用月旭超高效色譜柱(Ultimate? XB-C18,4.6×50mm,1.8μm)、常規的液相色譜儀搭配使用時(shí),由于系統死體積大,會(huì )影響到峰形,下圖是羅氟斯特項目,可以看到色譜峰都出現了前延的現象。
三、拖尾:(拖尾因子Tf>1.05)
1. 降低pH,抑制硅羥基的電離
2、增加緩沖鹽,加大緩沖作用
3、因為每種緩沖鹽的緩沖能力不一樣,可以通過(guò)更換緩沖鹽來(lái)調整:
4、屏蔽硅羥基的影響(如加入三乙胺)
在我們進(jìn)行定性定量的檢測分析時(shí),色譜峰形對我們的實(shí)驗結果有較大影響,因而保證良好的峰形,是我們實(shí)驗成功的關(guān)鍵,而排查和解決異常峰形問(wèn)題自然也是我們實(shí)驗分析的重要技能。